除四害公司消毒试剂与代器
① 试剂
a) 溶葡萄球菌酶的标准参考物质;
b) 色源底物KNR-PG,1 : 5(质量比)悬浊液备用;
c) 甘氨酸,氢氧化钠均为分析纯;配成〇. 2 mol/L Gly-NaOH缓冲液备用;
d) 95%乙醇,分析纯;
e) Tris,HCl均为分析纯;配成0.05 mol/L的Tris-HCl缓冲液。
② 除四害公司消毒仪器与设备
a) 分光光度计(250 nm?700 nm);
b) 高速离心机(10 〇〇〇 r/min);
c) 电热恒温水浴(±1 °C);
d) pH计,精密型;
e) 自动天平,感量为0.1 mg。
3)除四害公司消毒 测定方法与步骤
① 酶标准溶液制备:准确称取2.0 mg溶葡萄球菌酶标准试剂于无菌、干燥的Eppendorf管中,经 0. 2 mol/L Gly-NaOH缓冲液二次稀释,配制成0. 02 mg/mL酶标准溶液,待用。
② 标准曲线制备:取洁净干燥的Eppendorf管7只,先按表2-14中序号1的内容每管中加入底物 150 juL,然后按序号2加入不同量的0. 2 mol/L Gly-NaOH缓冲液。并把所有加好缓冲液的Eppen- dorf管置于37 °C的恒温水浴中预热3 min?5 min。
然后,按序号3加入不同量的酶标准溶液,置于37 °C的恒温水浴中定时反应20 min。从水浴中取 出Eppendorf管,每管中加入300 |LtL95%乙醇并离心(10 000 r/min)10 min。结束后,取上清液于另外的7只洁净Eppendorf管中,于595 nm处测定吸光度,液槽的光径为1 cm,以1、2号管的混合溶液作空白参照。
根据测得的A值及相应的酶标准溶液浓度,可绘制A595-C标准曲线。标准曲线的制备程序见
消毒剂等类型。
植物提取物消毒剂的剂型有喷雾剂、液体剂型、酊剂或膏霜剂等。是药用植物有效杀(抑)微生物成分,溶解于**溶剂(或水)中,再配以助剂制成。能用喷洒、浸泡、雾化法、涂搽等方法进行消毒。消毒剂原液一般为浅褐色或棕褐色,弱碱性,pH值在7. 3?7. 8之间。
喷雾型植物提取物消毒剂主要消毒室内空气和物体表面,如玻璃、桌面、家具、电器,也可用于手和皮肤消毒;液体剂型用以浸泡消毒用品、玩具等,酊剂和膏霜剂采用涂搽法消毒。
除四害公司消毒标准曲线的制备
酶B标准曲线的测试操作程序见表2-12。
表2-12标准曲线的制备程序
管 号012345
1%?1.2%底物/mL500500500500500500
磷酸 PBS/j^L500480*460440420400
37 °C,水浴 3 min?5 min
酶B标准液“L
摇匀,37 °C,15 min
终止剂“L1 0001 0001 0001 0001 0001 000
离心10 000 r/min,8 min,取上清以0号管作空白于波长540 nm,l cm光径,狭缝2检测。绘制标 准曲线。用3个不同的标准管,采用相同的浓度连续测定3次,计算同一加样量对应的3个吸光度的平 均值。再作出此底物对应的标准曲线。此曲线可连续使用。底物使用2个?3个月后或更换底物均需重做曲线。
4)除四害公司消毒待测溶液酶活性的测定
试样经适量稀释,方法步骤与上述标准曲线制作过程相同,加样量一般在100 根据待测溶液
的光吸收值(A)-标准曲线上查出对应的酶活性单位数,即可计算出待测溶液的酶活性。
5)测定结果的计算
试样中溶菌酶的酶活性可按下式计算:
式中:C一样品中的酶活性,U/mL;
A—本方法检测的酶的含量,U
V—实际加样量,mL;
X一样品中溶菌酶的含量,%。
样品测定也需做3次平行测定。通常3次测定的样品均需分别做3次稀释。3次测定可在同一试验中进行,也可分3次试验进行。
6)测定方法的准确度和精密度
应用本方法测定酶活性的相对误差<15%,3次测定相对标准偏差不**过±15%。
(2)溶葡萄球菌酶的测定方法
1) 原理
溶葡萄球菌酶的定量检测用比色法,以偶联KNR艳蓝染料的金黄色葡萄球菌菌体死细胞壁为色源底物,根据酶作用过程中定量地释放的带有KNR染料基团的小分子可溶性片段产物,在除去未反应 的不溶性底物后,对反应上清液进行比色测定,以求知酶的活性。此法简便易行,灵敏直观。